请参见Kim HJ, Song EJ, Lee KJ. Proteomic analysis of protein phosphorylations in heat shock response and thermotolerance. J Biol Chem, 2002, 277 (26): 23193-23207.[
如何做蛋白的体外磷酸化
嗯，磷酸化蛋白的抗体一定要选好，最好不要买santa的，可以买upstate的,就是millipore的，或者abcam的。
第一，血清成分复杂，最好用密理博的Montage
Albumin
Deplete
Kit去除血清里50%的白蛋白
第二，磷酸化蛋白提取蛋白的时候，最好加入原钒酸钠，和磷酸酶抑制剂，防止蛋白脱磷酸化。
第三，不要用牛奶做封闭剂，用BSA。因为牛奶中含有磷酸化酪蛋白，防止非特异带。
第四，如果条带杂带多，而且，条带弱，可以选择millipore的signal
boost，增加条带特异性，而且，增强条带的亮度。