如何冻存细胞，怎么存细胞

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如何冻存细胞


一、材料
(一)仪器
1.
净化工作台
2.
离心机
3.
恒温水浴箱
4.
冰箱(4℃、-20℃、-70℃)
5.
倒置相差显微镜
6.
培养箱
7.
液氮冰箱
(二)玻璃器皿
1.
吸管(弯头、直头)
2.
培养瓶
3.
玻璃瓶(250ml、100ml)
4.
废液缸
(三)塑料器皿
1.
吸头
2.
枪头
3.
胶塞
4.
移液管(10ml)
5.
15ml离心管
6.
冻存管(1~2ml)
(四)其他物品
1.
微量加样枪
2.
红血球计数板
3.
记号笔
4.
医用橡皮膏
5.
移液枪
(五)试剂
1.
D-Hanks液
2.
小牛血清
3.
培养液
4.
双抗(青霉素、链霉素)
5.
胰蛋白酶(0.08%)
6.
1NHCl
7.
7.4%NaHCO3
8.
DMSO(分析纯)或无色新鲜甘油
二、操作步骤
(一)细胞冻存
1.
配制含10%DMSO或甘油、10~20%小牛血清的冻存培养液;
2.
取对数生长期的细胞，用胰蛋白酶把单层生长的细胞消化下来，悬浮生长的细胞则直接将细胞移至15ml离心管中、;
3.
离心1000rpm，5min;
4.
去除胰蛋白酶及旧的培养液，加入适量配制好的冻存培养液，用吸管轻轻吹打使细胞均匀，计数，调节冻存液中细胞的最终密度为5×106/ml~1×107/ml;
5.
将细胞分装入冻存管中，每管1~1.5
ml;
6.
在冻存管上标明细胞的名称，冻存时间及操作者;
7.
冻存:标准的冻存程序为降温速率-1~-2℃/
min;当温度达-25℃以下时，可




动物细胞的保存方法有哪些


一般采用细胞冻存，利用冻存技术将细胞置于-196℃液氮中低温保存，可以使细胞暂时脱离生长状态而将其细胞特性保存起来，这样在需要的时候再复苏细胞用于实验。 细胞冻存时向培养基中加入保护剂--终浓度5％．15％的甘油或二甲基亚砜(DMSO)，可使溶液冰点降低，加之在缓慢冻结条件下，细胞内水分透出，减少了冰晶形成，从而避免细胞损伤。 采用"慢冻快融"的方法能较好地保证细胞存活。
若细胞只需要暂时保存，则可用悬浮培养，但要维持细胞的贴壁状态，尽量不出现接触抑制。